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ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿用戶指南

更新時(shí)間:2025-05-27      點(diǎn)擊次數(shù):901
ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿用戶指南
產(chǎn)品概述
ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿專(zhuān)為細(xì)胞培養(yǎng)與高分辨率顯微鏡成像設(shè)計(jì),產(chǎn)自德國(guó),在科研領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。其直徑 35mm,底部采用特殊的 ibidi 聚合物蓋玻片或可選的玻璃材質(zhì),結(jié)合高壁設(shè)計(jì),為細(xì)胞培養(yǎng)與觀察提供了理想條件。
產(chǎn)品特點(diǎn)
  1. 光學(xué)性能:聚合物蓋玻片底部或玻璃底部,均具有高光學(xué)質(zhì)量。聚合物蓋玻片底部的折射率(nd 589nm)為 1.52,阿貝數(shù) 56,厚度 180μm(#1.5),在高分辨率顯微鏡下能提供清晰圖像,且自發(fā)熒光低,對(duì)細(xì)胞成像干擾極小 。玻璃底部(如用于特定應(yīng)用的 1.5h 玻璃蓋玻片,厚度 170μm±5μm)同樣具備出色光學(xué)性能,適用于全內(nèi)反射熒光(TIRF)、單分子及超分辨率顯微鏡等成像技術(shù) 。

  1. 理想細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境:經(jīng) ibiTreat 處理的表面為細(xì)胞提供了良好的粘附與生長(zhǎng)條件,多數(shù)貼壁細(xì)胞無(wú)需額外包被即可在此表面良好生長(zhǎng) 。對(duì)于有特殊需求的細(xì)胞培養(yǎng),還可進(jìn)行細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白包被。而未處理的疏水表面,可用于需特定包被的貼壁細(xì)胞培養(yǎng);bioinert 表面則阻止細(xì)胞粘附,適合懸浮細(xì)胞、細(xì)胞聚集體、球體及類(lèi)器官培養(yǎng) 。

  1. 減少蒸發(fā)設(shè)計(jì):培養(yǎng)皿蓋子設(shè)有鎖扣位置,能有效減少液體蒸發(fā),為在非加濕環(huán)境下的長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)與研究提供穩(wěn)定條件。同時(shí),培養(yǎng)皿采用透氣塑料材質(zhì),確保細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中二氧化碳和氧氣等氣體的正常交換 。

  1. 操作便捷與通用性:標(biāo)準(zhǔn) 35mm 直徑規(guī)格,方便操作與適配各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 。高壁設(shè)計(jì)不僅增加了培養(yǎng)容積(2ml),還便于日常使用時(shí)的拿取與操作 。此外,該培養(yǎng)皿與所有染色和固定溶劑兼容,可滿足多種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需求。

應(yīng)用場(chǎng)景
  1. 細(xì)胞培養(yǎng)與成像:適用于各類(lèi)細(xì)胞系的培養(yǎng),以及原代細(xì)胞培養(yǎng) 。結(jié)合其高分辨率成像能力,可用于免疫熒光染色后細(xì)胞的寬場(chǎng)和共聚焦熒光顯微鏡觀察,也適合活細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)間成像研究,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化等動(dòng)態(tài)過(guò)程 。

  1. 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn):為細(xì)胞轉(zhuǎn)染提供穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境,可通過(guò)后續(xù)成像或分析技術(shù),評(píng)估轉(zhuǎn)染效率與轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的功能變化 。

  1. 細(xì)胞定位與計(jì)數(shù):帶有 500µm 網(wǎng)格(如 µ-Dish 35 mm, high grid - 500)的版本,便于對(duì)細(xì)胞或細(xì)胞簇進(jìn)行定位,在計(jì)算轉(zhuǎn)染效率、統(tǒng)計(jì)特定區(qū)域內(nèi)細(xì)胞事件數(shù)量等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用 。

  1. 特殊顯微鏡應(yīng)用:使用特殊 DIC 蓋子,可用于微分干涉相差(DIC)顯微鏡觀察 。玻璃底部的培養(yǎng)皿版本,特別適用于 TIRF、單分子應(yīng)用以及超分辨率顯微鏡(如 STED、SIM、(F) PALM、(D) STORM)和熒光相關(guān)光譜(FCS)等顯微鏡技術(shù) 。

使用方法
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
  1. 培養(yǎng)皿檢查:收到培養(yǎng)皿后,檢查包裝是否完好,單個(gè)培養(yǎng)皿有無(wú)破損、污染跡象 。確認(rèn)產(chǎn)品規(guī)格、表面處理類(lèi)型(如 ibiTreat、uncoated、bioinert 等)是否與實(shí)驗(yàn)需求相符 。

  1. 試劑與耗材準(zhǔn)備

  • 細(xì)胞培養(yǎng)基:根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)胞類(lèi)型,選擇合適的培養(yǎng)基,并添加相應(yīng)的血清、抗生素、生長(zhǎng)因子等成分 。培養(yǎng)基需提前過(guò)濾除菌,確保無(wú)菌狀態(tài) 。

  • 細(xì)胞:復(fù)蘇凍存細(xì)胞或從培養(yǎng)瓶中消化獲取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液 。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)確定合適的接種密度。

  • 其他耗材:準(zhǔn)備無(wú)菌移液器吸頭、移液管、離心管、鑷子等耗材,所有耗材需保證無(wú)菌 。若需對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行額外包被(如使用 ECM 蛋白包被未處理表面的培養(yǎng)皿),準(zhǔn)備相應(yīng)包被試劑 。

細(xì)胞接種
  1. ibiTreat 表面培養(yǎng)皿:對(duì)于需在 ibiTreat 表面培養(yǎng)的細(xì)胞,直接將適量細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿中 。例如,若細(xì)胞接種密度為每平方厘米 1×10?個(gè)細(xì)胞,對(duì)于生長(zhǎng)面積 3.5cm2 的 µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿,可加入含有 3.5×10?個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液 。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿,使細(xì)胞均勻分布,避免產(chǎn)生氣泡,然后將培養(yǎng)皿放入 37℃、5% CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 。

  1. 未處理表面培養(yǎng)皿(若需包被):若使用未處理的疏水表面培養(yǎng)皿且需進(jìn)行 ECM 蛋白包被,先將包被試劑(如多聚賴氨酸、纖連蛋白等)稀釋至合適濃度 。取適量稀釋后的包被試劑加入培養(yǎng)皿,確保液體均勻覆蓋底部表面,室溫孵育 1-2 小時(shí)或按照試劑說(shuō)明書(shū)要求的時(shí)間孵育 。孵育結(jié)束后,用無(wú)菌 PBS 沖洗培養(yǎng)皿 2-3 次,去除未結(jié)合的包被試劑,然后進(jìn)行細(xì)胞接種,接種方法同 ibiTreat 表面培養(yǎng)皿 。

  1. bioinert 表面培養(yǎng)皿:對(duì)于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞、球體或類(lèi)器官的 bioinert 表面培養(yǎng)皿,直接將細(xì)胞懸液或含有細(xì)胞聚集體的溶液加入培養(yǎng)皿 。同樣輕輕晃動(dòng)使分布均勻后放入培養(yǎng)箱 。由于細(xì)胞不會(huì)粘附在 bioinert 表面,在操作和觀察過(guò)程中需注意避免溶液過(guò)度晃動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞聚集體位置改變 。

細(xì)胞培養(yǎng)與觀察
  1. 日常培養(yǎng):將接種細(xì)胞后的培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱,定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài) 。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度,每隔 1-2 天更換一次培養(yǎng)基,去除細(xì)胞代謝產(chǎn)物,補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 。觀察細(xì)胞時(shí),可在倒置顯微鏡下直接觀察培養(yǎng)皿中的細(xì)胞,注意細(xì)胞形態(tài)、密度變化等 。

  1. 顯微鏡成像

  • 熒光顯微鏡成像:若進(jìn)行熒光染色實(shí)驗(yàn),當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至合適階段,按照免疫熒光染色流程進(jìn)行操作 。包括固定細(xì)胞(如使用 4% 多聚甲醛固定 15-20 分鐘)、通透處理(0.1% Triton X-100 處理 10 分鐘)、封閉(5% BSA 封閉 30 分鐘)、一抗和二抗孵育等步驟 。染色完成后,用 PBS 清洗干凈,直接在熒光顯微鏡下觀察 。由于 ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yǎng)皿底部的低自發(fā)熒光特性,可獲得清晰的熒光圖像 。

  • 其他顯微鏡成像:如需進(jìn)行 TIRF、DIC 等特殊顯微鏡成像,根據(jù)相應(yīng)顯微鏡的要求,將培養(yǎng)皿放置在配套的載物臺(tái)上 。對(duì)于需使用特殊蓋子(如 DIC 蓋子)的實(shí)驗(yàn),在成像前更換為相應(yīng)蓋子 。調(diào)整顯微鏡參數(shù),獲取高質(zhì)量的細(xì)胞圖像 。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處理
  1. 廢棄物處理:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、一次性耗材等廢棄物,按照生物安全廢棄物處理規(guī)范進(jìn)行處理 。對(duì)于可能含原體或危險(xiǎn)生物材料的廢棄物,需先進(jìn)行高壓滅菌或化學(xué)消毒處理,然后丟棄 。

  1. 培養(yǎng)皿處理:若培養(yǎng)皿為一次性使用產(chǎn)品,直接丟棄至相應(yīng)廢棄物容器 。若培養(yǎng)皿可重復(fù)使用(但需確認(rèn)產(chǎn)品說(shuō)明是否支持),先將培養(yǎng)皿中的液體倒出,用清水沖洗干凈,然后浸泡在合適的清潔劑溶液中,超聲清洗去除殘留細(xì)胞和雜質(zhì) 。清洗后用蒸餾水沖洗多次,烘干備用 。但需注意,重復(fù)使用可能會(huì)影響培養(yǎng)皿的性能,尤其是底部的光學(xué)性能和表面特性,對(duì)于對(duì)實(shí)驗(yàn)精度要求的實(shí)驗(yàn),建議使用新的培養(yǎng)皿 。

注意事項(xiàng)
  1. 培養(yǎng)皿儲(chǔ)存:未使用的培養(yǎng)皿應(yīng)儲(chǔ)存在干燥、清潔的環(huán)境中,避免陽(yáng)光直射和高溫 。對(duì)于已開(kāi)封但未使用完的培養(yǎng)皿,需密封保存,防止灰塵和微生物污染 。

  1. 操作過(guò)程無(wú)菌要求:在整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范 。在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行操作,使用前用 75% 酒精擦拭臺(tái)面和雙手,對(duì)使用的耗材、試劑等進(jìn)行表面消毒 。避免交叉污染,不同細(xì)胞系或?qū)嶒?yàn)的操作應(yīng)分開(kāi)進(jìn)行,使用不同的移液器和耗材 。

  1. 蓋子鎖扣使用:當(dāng)需要減少液體蒸發(fā)時(shí)(如在非加濕的顯微鏡載物臺(tái)上進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間成像實(shí)驗(yàn)),使用蓋子的鎖扣功能 。但在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)正常培養(yǎng)時(shí),無(wú)需一直使用鎖扣,以免影響氣體交換 。

  1. 避免底部刮擦:在操作培養(yǎng)皿過(guò)程中,注意避免尖銳物品刮擦底部,尤其是用于高分辨率成像的聚合物蓋玻片底部或玻璃底部,刮擦可能會(huì)導(dǎo)致底部光學(xué)性能下降,影響成像質(zhì)量 。拿取培養(yǎng)皿時(shí),應(yīng)手持培養(yǎng)皿側(cè)壁,避免接觸底部 。

  1. 特殊表面使用注意:對(duì)于 bioinert 表面的培養(yǎng)皿,由于其阻止細(xì)胞粘附的特性,在加入細(xì)胞懸液后,盡量減少培養(yǎng)皿的移動(dòng)和晃動(dòng),以免細(xì)胞聚集體分散 。同時(shí),該表面不能進(jìn)行額外的蛋白包被等處理,需嚴(yán)格按照其適用范圍使用 。



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